Hémogramme

Introduction :

Le tissu sanguin réparti dans tout l’organisme, comporte les organes hématopoïétiques et le sang périphérique.

Le sang périphérique se comporte de deux phases :

– Une phase liquide, le plasma constitué d’eau, de sels minéraux, de protéines, de globulines à activité anticorps, de facteurs de l’hémostase et de facteurs nutritionnels.

– Une phase cellulaire, constituée d’éléments figurés du sang : globules rouges(hématies, érythrocytes), globules blancs (leucocytes), et plaquettes sanguines (thrombocytes).

L’hémogramme comprend : la mesure de l’hématocrite, le dosage de l’hémoglobuline, la numération des globules rouges, des globules blancs et des plaquettes, le calcul des indices globulaires (VGM, CCMH, TGMH) et le calcul d’autres paramètres (formule leucocytaire automatisée, Indice de Distribution des Globules Rouges (IDR), Indice de Distribution des Plaquettes (IDP), Volume Moyen Plaquettaire (VMP).

L’hémogramme doit toujours être complété par la numération des réticulocytes et l’étude des éléments figurés sur un frottis sanguin (FS).

Le terme NFS ou FNS doit être abandonné voire proscrit du langage médical en raison des limites d’exploration de cet examen (numération sanguine et formule sanguine).

Étude quantitative et qualitative des globules rouges :

Les globules rouges (GR) encore appelés hématies ou érythrocytes sont des cellules anucléées dont la production quotidienne est assurée par l’éryhropoïèse médullaire.

Leur rôle principal est de transporter les gaz du sang des poumon (O2) vers les tissus et des tissus vers les poumon (CO2) grâce à l’hémoglobine.

Les différentes méthodes d’étude des globules rouges sont exposées ci-après :

Mesure de l’hématocrite (Hte) :

Le sang se comporte comme une suspension d’éléments figurés dans le plasma. L’hématocrite mesure le rapport entre le volume (v) occupé par les éléments figurés et le volume sanguin total (V) de l’échantillon de sang analysé. L’unité de mesure est le l/L ou pourcentage (%).

La réalisation d’un taux d’hématocrite nécessite de disposer d’une microcentrifugeuse dédiée, de tiges ou tubes capillaires adaptés, de pâte à modeler. Le résultat est obtenu après une centrifugation de 5 minutes à 1 500 t/mn.

L’erreur sur la mesure est de plus ou moins 2 % ; c’est un examen fiable ; il est de réalisation simple et peu onéreux. Il est très utile en pratique médicale courante pour évaluer une anémie. Les valeurs normales en fonction de l’âge et du sexe sont données dans le Tableau N°1.

Numération des globules rouges :

Deux techniques sont classiquement disponibles pour faire une numération de GR : manuelle et automatisée.

1- Numération manuelle en cellules de Malassez :

Le principe est basé sur le décompte au microscope optique de GR contenus dans un volume de sang déterminé et à une dilution connue ; c’est une méthode qui est à la portée de tout laboratoire , donc utilisable en toute circonstance ; c’est malheureusement une méthode peu fiable avec des erreurs de plus ou moins 15 % dues à des causes multiples (erreurs liées à l’opérateur, à l’appareillage utilisé, ou à la technique proprement dite). C’est une méthode aujourd’hui peu pratiquée remplacée par la mesure automatisée.

2- Numération automatisée par compteur électronique :

C’est une méthode plus sûre mais qui nécessite un appareillage coûteux. Cependant elle est actuellement disponible dans la majorité des laboratoires d’analyse publiques ou privés. L’erreur de mesure est de +- 2 % rendant cette méthode très fiable. Les mesures sont habituellement réalisées soit par mesure d’impédance soit par laser et de plus en plus en cytométrie de flux. Les valeurs normales sont retrouvées dans le Tableau N°1.

Dosage de l’Hémoglobine (Hb) :

Il se fait après transformation de l’hémoglobine en cyanméthémoglobine : la densité optique de la solution est mesurée à 540 nm par colorimétrie ; l’erreur sur la mesure est de 10 % en mode manuel.

Les variations pathologiques du taux d’hémoglobine sont :

– Anémie : diminution du taux d’Hb en fonction de l’âge et du sexe (Tableau N°1).

– Polyglobulie : augmentation du taux d’Hb en fonction de l’âge et du sexe.

Dans la polyglobulie vraie, l’Hb, le taux d’hématocrite et le taux de GR sont augmentés de façon parallèle.

Calcul des indices globulaires :

Les trois mesures (Hte, GR, Hb) permettent de calculer le VGM, la CCMH et la TGMH.

1- Volume globulaire moyen (VGM) :

VGM = Hématocrite x 10/nombre de GR en millions.

VGM = 80 – 100 Fl ou μ3 (femtolitre ou micron3).

C’est le premier indice important pour caractériser (typer) une anémie.

– Si le VGM est inférieur à 80 μ3, on parle de microcytose.

– Si le VGM est compris entre 80 et 100 μ3, on parle de normocytose.

– Si le VGM est supérieur à 100 μ3, on parle de macrocytose.

2- Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (CCMH) :

CCMH = Hémoglobine x 100/Hématocrite. Unité : l/L ou %.

CCMH = 32 – 38 %.

C’est le deuxième indice important pour caractériser (typer) une anémie.

– Si CCMH comprise entre 32 et 38 %, on parle de normochromie.

– Si CCMH inférieure à 32 %, on parle d’hypochromie.

– Il n’existe pas d’hyperchromie.

3- Teneur globulaire moyenne d’hémoglobine (TGMH) :

TGMH = Hémoglobine x 10/GR (millions).

TGMH = 27 – 31 pg (picogramme).

– Si TGMH comprise entre 27 et 31, on parle de normochromie.

– Si TGMH inférieure à 27, on parle d’hypochromie.

La TGMH indique le poids moyen d’hémoglobine contenu dans chaque GR ; sa variation est parallèle à celle du VGM : elle est abaissée en cas de microcytose et augmentée en cas de macrocytose.

Numération des réticulocytes :

Les réticulocytes sont des globules rouges jeunes qui viennent de perdre leurs noyaux dans la moelle osseuse tout en poursuivant leur maturation pendant 24 à 48 heures ; ils passent ensuite dans le sang périphérique et deviennent des GR matures au bout de 24 heures. Ils sont reconnaissables après coloration par le bleu de crésyl brillant ou le bleu de méthylène . Ils reflètent la production quantitative quotidienne d’hématies par la moelle osseuse hématopoïétique.

Le taux de réticulocytes permet ainsi d’apprécier la production médullaire quotidienne de globules rouges qui est relatives de 0,5 à 2 % soit 25 000 – 100 000/μl/j. En pratique, seul le taux absolu présente un intérêt. Ainsi, lorsque le taux de réticulocyte est inférieur à 120 000/μl, il traduit une anémie arégénérative (cause centrale). Si le taux est supérieur à 120 000/μl, il témoigne d’une anémie régénérative (cause périphérique) (Tableau N°1).

C’est un examen clé qui précise le mécanisme central ou périphérique d’une anémie.

Examen des globules rouges sur frottis sanguin (FS) :

Le frottis sanguin est obtenu après prélèvement et étalement d’une goutte de sang sur une lame de verre ; le frottis est posé sur un plan dur pour sécher spontanément, après quoi il est coloré au May-Grünwald Giemsa (MGG). La lecture du FS est faite au microscope optique.

L’examen des globules rouges au microscope optique donne des renseignements sur leur taille, leur couleur et leur forme ; c’est un examen très utile pour caractériser une anémie : il confirme ou infirme les données obtenues par le calcul des indices globulaires.

– Les principales anomalies de formes sont (Figure 1) : une anisocytose, une poïkylocytose, une acanthocytose, la présence d’hématies cibles, de dacryocytes, de drépanocytes, d’elliptocytes, de schizocytes, de sphérocytes, et de stomatocytes. La présence de GR nuclées = érythroblastes ou d’hématies ponctuées normalement absentes au niveau du sang périphérique.

– Les anomalies de taille sont : la microcytose (VGM inférieur à 80 Fl), la macrocytose (VGM supérieur à 100 Fl).

– Les anomalies de couleur sont : l’hypochromie (CCMH inférieure à 32 %) correspondant à une décoloration du GR liée à une concentration insuffisante en hémoglobine intra érythrocytaire.

Étude quantitative et qualitative des globules blancs :

Les globules blancs normaux du sang périphérique sont représentés par :

– Les Granulocytes Neutrophiles ou polynucléaires neutrophiles (PN).

– Les Granulocytes Eosinophiles ou polynucléaires eosinophiles (PE).

– Les Granulocytes Basophiles ou polynucléaires basophiles (PB).

– Les lymphocytes (L).

– Les monocytes (M).

Numération des globules blancs (GB) :

La numération des GB porte sur l’ensemble des cellules sus citées. Le principe de comptage est le même que pour le GR : manuel et automatisé.

La numération manuelle est pratiquement abandonnée au profit du comptage électronique plus fiable.

Le taux de GB chez l’adulte est de 4 000 – 10 000/μl.

La formule leucocytaire (équilibre leucocytaire) ou décompte respectif des différentes catégories de GB. Le résultat est rendu en pourcentage dans l’ordre suivant (PN, PE, PB, L, M).

L’interprétation rigoureuse de l’équilibre leucocytaire se fait sur les valeurs absolues calculées ou données par l’automate.

Les taux respectifs des différentes catégories de GB sont chez l’adulte (Tableau N°1).

– PN = 40 – 70 %, soit en valeur absolue : 1 600 – 7 000/mm3.

– PE = 0 – 7 %, soit en valeur absolue : 0 – 700/mm3.

– PB = 0 – 1,5 %, soit en valeur absolue : 0 – 150/mm3.

– L = 20 – 40 %, soit en valeur absolue : 800 – 4 000/mm3.

– M = 3 – 7 %, soit en valeur absolue : 120 – 700/mm3.

Variations pathologiques des globules blancs :

– GB supérieurs à 10 000 : hyperleucocytose.

– PN supérieurs à 7 000 : polynucléose neutrophile.

– GB inférieurs à 4 000 : leucopénie.

– PN inférieurs à 1 600 : neutropénie.

– PE supérieurs à 700 : hyperéosinophile.

– PB supérieurs à 150 : hyperbasophilémie.

– L supérieurs à 4 000 : hyperlymphocytose.

– L inférieurs à 800 : lymphopénie.

– M supérieurs à 700 : hypermonocytose.

– M inférieurs à 120 : monocytopénie.

Examen des globules blancs sur frottis sanguin (FS) :

L’examen des globules blancs au faible puis au fort grossissement donne des renseignement très utiles sur leur répartition (équilibre leucocytaire), leur forme, leur aspect et leur taille ; c’est un examen très utile pour révéler certaines anomalies des GB non données par les automates :

– La myélémie : présence de cellules granuleuses immatures (promyélocytes, myélocytes, métamyélocytes) normalement absentes du sang.

– Présence de lymphocytes hyperbasophiles lors d’infections virales (mononucléose infectieuse) ou parasitaires (toxoplasmose).

– Présence de leucoblastes (blastes) révélant une leucémie aiguë (myéloblastes ou lymphoblastes).

Le FS permet d’établir une formule d’Arneth (FA) qui est l’évaluation de la répartition des PN en fonction du nombre de segments de leur noyau selon une courbe (nombre de PN/nombre de segments) ; la déviation à droite (hyper segmentation des PN) de la FA se voit au cours des carences en facteurs antipernicieux (vitamines B12 et acide folique).

Étude quantitative et qualitative des plaquettes sanguines :

Les plaquettes sanguines ou thrombocytes sont des éléments de petite taille provenant de mégacaryocytes de la moelle osseuse. Elles jouent un rôle très important dans les mécanismes de l’hémostase.

Numération plaquettaire :

La numération plaquettaire en cellules de Malassez ou par comptage automatisé est sujette à une marge d’erreur importante (plus ou moins 15 %) imposant un contrôle visuel indispensable par frottis sanguin devant toute thrombopénie. Le taux de plaquettes normal varie de 150 000 – 400/μl.

Examen des plaquettes sur frottis sanguin (FS) :

La visualisation des plaquettes sur FS permet d’évaluer de façon assez fiable leur nombre et leurs aspects (forme, taille, granularité, disposition en amas ou isolées) et ainsi mieux interpréter les données fournies par le comptage électronique.

C’est un examen très utile entre les mains d’un cytologiste expérimenté.

Sur un FS fait à partir d’un prélèvement veineux sous anticoagulant (EDTA : Ethylene diamine tetra acetic acid), les plaquettes apparaissent isolées et réparties de façon homogène sur la lame.

Sur un prélèvement fait au doigt, les plaquettes se retrouvent en queue de frottis sous formes d’amas plus ou moins importants :

– La présence d’amas de moins de 5 plaquettes/amas, côté +, correspond à un taux de 50 000 à 100 000 plaquettes/μl.

– La présence d’amas de 5 à 10 plaquettes/amas, côté ++, correspond à un taux de 50 000 à 100 000 plaquettes/μl.

– La présence d’amas de plus de 10 plaquettes/amas, côté +++, correspond à un taux de plaquettes supérieur ou égal à 100 000 plaquettes/μl.

Il faut apprécier la taille des plaquettes à la recherche de macrothrombocytes témoignant souvent de thrombopathies acquises ou congénitales, ou rarement de microthrombocytes.

À des taux supérieurs à 50 000 plaquettes/μl, les patients ne saignent pas spontanément, sauf en cas de causes locales ou générales surajoutées.

Les thrombopénies franches (plaquettes inférieures à 50 000/μl) et aiguës entraînent volontiers un saignement muqueux, cutané voire viscérale, c’est le purpura hémorragique.

Le risque d’hémorragies graves, en particulier cérébro-méningées et rétiniennes, est important en dessous de 20 000 plaquettes/μl.

Variations pathologiques du taux de plaquettes :

Un taux de plaquettes :

– Supérieur à 400 000/μl caractérise une thrombocytose ou hyperplaquettose.

– Supérieur à 600 000 /μl définit une thrombocythémie.

– Inférieur à 150 000/μl définit une thrombopénie.

Variations globales des éléments figurés du sang :

Bicytopénie : diminution de deux lignées sanguines, exemple : anémie plus thrombopénie.

Pancytopénie : diminution de trois lignée sanguines, exemple : anémie plus neutropénie plus thrombopénie.

Les cytopénies peuvent être de mécanisme périphérique (destruction, consommation, répartition) ou de mécanisme central (défaut de production).

Paramètres : unités de mesure	Femmes	Hommes	Enfants	Nouveau-né
Globules rouges : 105 elts/μl. Autres unités : terra/l ou 1012/l	4,8 +- 0,5	5,4 +- 0,8	4 +- 0,5	5 +- 1
Hématocrite = % Autre unité : l/l	42 +- 5 0,42 +- 0,05	47 +- 5 0,47 +- 0,05	34 +- 2 0,34 +- 0,02	52 +- 8 0,52 +- 0,08
Hémoglobine = g/dl ou g/100 ml ou g/dl x 0,61 = mmol/l	14 +- 2	16 +- 2	12 +- 2	17 +- 3
Réticulocytes = elts/μl. Autres unités : giga/l ou 10*9/l	25 000 à 100 000	25 000 à 100 000	25 000 à 100 000	25 000 à 100 000
VGM = μ3 ou fl (femtolitre)	90 +- 10	90 +- 10	84 +- 7	100 +- 5
CCMH = % ou % x 0,62 = mmole/l	35 +- 3	35 +- 3	32 +- 3	32 +- 3
TGMH = pg (picogramme) ou pg x 0,062 = femtomole = 10-5 mole	29 +- 2	29 +- 2	29 +- 2	29 +- 2
Globules blancs : elts/μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	4 000 – 10 000	4 000 – 10 000	10 000 +- 5 000	15 000 +- 5 000
PN = % et elts/μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	40 – 70% 1 600 – 7 000	40 – 70% 1 600 – 7 000	*	*
PE = % et elts/ μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	0 – 7 % 0 – 700	0 – 7 % 0 – 700	0 – 7 % 0 – 700	0 – 7 % 0 – 700
PB =% et elts/ μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	0 – 1,5 % à – 150	0 – 1,5 % à – 150	0 – 1,5 % à – 150	0 – 1,5 % à – 150
L =% et elts/μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	20 – 40 % 800 – 4 000	20 – 40 % 800 – 4 000	*	*
M=% et elts/μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	3 – 7 % 120 – 700	3 – 7 % 120 – 700	3 – 7 % 120 – 700	3 – 7 % 120 – 700
Plaquettes=% et elts/μl Unités internationales : giga/l ou 10*9/l	150 000 à 400 000	150 000 à 400 000	150 000 à 400 000	150 000 à 400 000

Remarque : Chez l’enfant, jusqu’à l’âge de 4ans, la formule leucocytaire est inversée (% L > % PN).

A l’âge de 5 ans : (% L = % PN) ; A partir de 6 ans : (% PN > % L)

Les valeurs normales données dans ce tableau sont exprimées en unités classiques ; pour exprimer en unités internationales (UI), convertir en multipliant par le coefficient donné pour chaque paramètre suivant : Hb, CCMH, TGMH.

Pour les réticulocytes : si > 120 000/μl = anémie régénérative ; si < 120 000/μl = anémie régénérative

Tableau N°1 : Valeurs normales de l’hémogramme en fonction de l’âge et du sexe.